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一、血細胞計數原理
1.電阻抗法原理:血細胞為不良導體,用等滲電解質溶液稀釋的血細胞懸液通過兩側有穩定電流的小孔時,由于細胞導電性質較電解質溶液低,小孔感應區內電阻增加,瞬間引起電壓變化產生一個脈沖信號,即通過脈沖。脈沖信號經過放大、甄別、整形后,送入計數系統,而得到細胞計數結果。根據脈沖大小還可分析細胞體積,提供細胞體積分布圖形。
2.流式細胞術與光散射血細胞檢測原理:利用流式細胞術,單個細胞隨著流體動力聚集的鞘流液通過激光照射的檢測區時,使光束發生折射、衍射和散射,散射光由光檢測器接收后產生脈沖、脈沖大小與被照細胞的大小成正比,脈沖的數量代表細胞的數量。
二、白細胞分類原理
1.白細胞三分類原理:根據電阻抗法原理,不同體積的白細胞通過小孔時產生的脈沖大小有明顯差異,儀器根據脈沖的大小將白細胞進行分群。標本中加入溶血劑,將紅細胞溶解,儀器將從白細胞計數池中測量得到的大于35fl電子脈沖的數量作為白細胞計數。同時根據脈沖的大小將血內白細胞分為三群:小細胞群(35~90fl,主要為淋巴細胞)、中間細胞群(91~160fl,包括單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞及幼稚細胞等)和大細胞群(161~450fl,以中性粒細胞為主)。
其特點是檢測速度快,操作簡便,可大大提高工作效率。此類儀器可用于常規檢查標本白細胞分類的篩選,對儀器檢測出的陽性標本應該進一步做顯微鏡檢查。如有懷疑血液病的病人,即便儀器沒提示異常,也應作血涂片,顯微鏡檢查。
2.五分類原理:由電阻抗法的三分群發展為多項技術(激光、射頻及化學染色)聯合同時檢測一個細胞,綜合分析實驗數據,得出白細胞五分類結果。此法測定細胞多,特異性強,現在認為是較理想的自動化血細胞分類法。
三、血紅蛋白測定原理
三分群或五分類血液分析儀均用分光光度法測定血紅蛋白。其原理是含溶血劑的稀釋液使紅細胞溶解并釋放出血紅蛋白,血紅蛋白與溶血劑中某些成分結合,形成一種穩定的血紅蛋白衍生物,在特定的光波范圍(530~550nm)下進行比色,因吸光度的變化與血液血紅蛋白濃度成正比,從而計算出血紅蛋白濃度。